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伯乐荧光定量pcr仪实际操作时都需要注意什么?

发布时间:2021-03-05   点击次数:85次
   伯乐荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平,这就是分析荧光数据的水平。
  伯乐荧光定量pcr仪实验操作注意事项:
  尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因,样品间的交叉污染也是原因之一。因此,不仅要在进行扩增反应是谨慎认真,在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意:
  1.戴一次性手套,若不小心溅上反应液,立即更换手套;
  2.使用一次性吸头,严禁与PCR产物分析室的吸头混用,吸头不要长时间暴露于空气中,避免气溶胶的污染;
  3.避免反应液飞溅,打开反应管时为避免此种情况,开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上,应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面;
  4.操作多份样品时,制备反应混合液,先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的准确度;
  5.后加入反应模板,加入后盖紧反应管;
  6.伯乐荧光定量pcr仪操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;
  7.尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,使用可替换或高压处理的加样器。
  如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;
  8.重复实验,验证结果,慎下结论。
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